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液相色谱使用知识:流动相使用前为什么要脱气?
日期:2022-01-10 15:29:58    点击:

流动相使用前为什么要脱气?

解答:首先我们了解一下不脱气可能造成的影响:

气泡会增加基线的噪音,造成灵敏度下降,甚至无法分析(噪声增大,基线不稳,突然跳动)。

溶解的氧气还会导致样品中某些组份被氧化,柱中固定相(如烷基胺)发生反应,降解而改变柱的分离性能。

溶解氧能与某些溶剂(如甲醇、四氢呋喃)形成有紫外吸收的络合物,此络合物会提高背景吸收(特别是在260nm以下),并导致检测灵敏度的轻微降低,会在梯度淋洗时造成基线漂移或形成鬼峰(假峰)。

若用FLD(荧光检测器),溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象,特别是对芳香烃、脂肪醛、酮等。在某些情况下,荧光响应可降低达95%。

脱气的作用:除去其中溶解的气体(如O2),以防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时,因压力降低而产生气泡。

排出气泡能减少泵工作的伤害,提高UV检测器的性能高,改善灵敏度。

脱气的方式:加热回流法:效果较好,但操作复杂,且有毒性挥发污染,同时需要考虑低沸点溶剂挥发造成的组成变化。

抽真空脱气法:易抽走有机相。

超声脱气法:流动相放在超声波容器中(一般500ml溶液需超声20~30min),此法不影响溶剂组成。超声时应注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触,以免玻璃瓶破裂,容器内液面不要高出水面太多。

氦气脱气法:在色谱操作前和进行时,将惰性气体喷入溶剂中。严格来说,此方法不能将溶剂脱气,它只是用一种低溶解度的惰性气体(通常是氦)将空气替换出来。主要利用液体中氦气的溶解度比空气低,连续吹氦脱气,效果较好,但成本高。

在线真空脱气法:利用在线脱气机在线脱气,智能控制,无需额外操作,成本低,

脱气效果明显优于以上几种方法,并适用于多元溶剂体系。

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